Лечащий Врач #9, 2008


Разработка и внедрение в практику здравоохранения РФ новой отечественной расщепленной виросомальной вакцины против гриппа

И. В. Зверков, М. К. Ерофеева, В. Л. Максакова, С.А Коровкин, Н.А Михайлова, А. Н. Миронов, С. Я. Мельников, Н. В. Дылдина, И. Ю. Никоноров
Грипп представляет серьезную проблему для здравоохранения всех стран мира. Ежегодно эпидемии охватывают до 10% всего населения планеты, а во время гриппозных пандемий это число может возрастать в 4–6 раз. Поэтому решение вопроса профилактики гриппа рассматривается ВОЗ в качестве одной из первоочередных задач. На сегодняшний день наиболее действенным методом борьбы, сочетающим высокую специфичность, профилактическую эффективность и экономичность, является вакцинация. Короткий инкубационный период, острое начало заболевания, высокая контагиозность инфекции способствуют ее молниеносному распространению среди человеческой популяции, что резко снижает возможность применения других средств защиты, в том числе химиопрофилактики. Российские ученые разработали гриппозную вакцину нового вида «Грифор®».

Разработанная технология приготовления вакцины «Грифор®» позволила обеспечить презентацию поверхностных антигенов вируса гриппа в виде виросом, а внутренних антигенов вируса гриппа— в виде мицелл с максимальным сохранением их антигенной структуры. Этого удалось достигнуть благодаря применению высокоэффективного современного детергента октилгликозида. В процессе расщепления вирионов детергентом стало возможным максимально перевести в растворимое состояние поверхностные антигены вируса гриппа (гемагглютинин и нейраминидазу), внутренние антигены (мембранный белок и рибонуклеокапсид), а также значительную часть липидов вирусной мембраны. Благодаря применению оригинальной технологии сборки вирусных антигенов в составе вакцины «Грифор®», липиды в сочетании с поверхностными антигенами образуют псевдовирусные структуры, известные в мировой литературе как виросомы.

Морфологический анализ проводили методом электронной микроскопии с использованием технологии негативного контрастирования.

Рисунок.. Электронная микроскопия вакцины «Грифор®»Проведенный анализ показал, что основными морфологическими структурами в составе вакцины «Грифор®» являются вирусспецифические виросомы размером от 90 нм до 180 нм (рисунок).

Вакцину «Грифор®» следует считать вакциной нового поколения по следующим причинам: 1)наличие виросом в составе вакцины «Грифор®» потенциально увеличивает ее иммуногенность при вакцинации людей, не имеющих «иммунной памяти» к антигенам вируса гриппа; 2)презентация поверхностных антигенов в виде виросом, а также наличие внутренних антигенов, выделенных с максимальным сохранением антигенной структуры, позволяет индуцировать развитие клеточного иммунитета у людей,вакцинированных препаратом «Грифор®».

В период 2005–2008 года были проведены доклинические и клинические исследования вакцины «Грифор®».

Доклиническое изучение реактогенности и безопасности проводили на белых мышах, морских свинках и кроликах.

Исследования на лабораторных животных доказали, что вакцина «Грифор®» нетоксична, безопасна, обладает выраженными иммуногенными свойствами, что позволило рекомендовать проведение I фазы клинических исследований препарата на ограниченном контингенте добровольцев. Клиническое исследование (I фаза) вакцины «Грифор®» проводили на основании решения Федерального комитета по этике и разрешения Росздравнадзора на базе ГУ НИИ вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова РАМН (г. Москва) на здоровых добровольцах с целью изучения реактогенности, безопасности и иммуногенности препарата. В клиническом исследовании приняли участие 40 человек, в возрасте от 18 до 50 лет, полностью соответствующие критериям включения протокола клинических исследований. Методом случайной выборки все добровольцы были разделены на 2 группы. В 1 группе 20 человек были привиты вакциной «Грифор®», с содержанием гемагглютинина (ГА)— 45 мкг/доза— по 15 мкг ГА штаммов вирусов гриппа подтипов А (H1N1 и H3N2) и типа В. Во 2 группе (контрольной)— 20 человек, в качестве плацебо получили раствор натрия хлорида изотонического в объеме 0,5 мл.

Вакцину вводили однократно внутримышечно (в дельтовидную мышцу). Наблюдение за добровольцами проводили в течение 28 дней после вакцинации (первые 7 дней проводился осмотр добровольцев врачом-исследователем, с 8 по 28 дни добровольцы заполняли дневники самонаблюдения).

По результатам клинического исследования были сделаны следующие выводы:

  1. Вакцинация препаратом «Грифор®» не сопровождалась развитием нежелательных явлений в поствакцинальном периоде, а возникшие слабовыраженные общие и местные реакции были кратковременны и не вызывали ухудшения состояния здоровья привитых, что свидетельствовало о безопасности препарата.
  2. К 28 дню поствакцинального периода наблюдалось снижение среднего уровня общего IgE (рср0–28<0,001), что связано с входящими в состав вакцины «Грифор®» специфическими структурами виросомами, способными изменять соотношение Th1/Th2 в сторону Th1.
  3. Иммунизация добровольцев вакциной «Грифор®» обеспечила следующие показатели иммуногенности к вирусу гриппа типов А (H1N1), A (H3N2) и В:
  • уровень сероконверсии 55%, 50% и 45%;
  • уровень серопротекции 95%, 90% и 100%;
  • кратность прироста антител 3,8; 3,5 и 2,7 соответственно;
  • у добровольцев с исходным титром антител ≤1:20 после вакцинации препаратом «Грифор®» наблюдался 4-кратный прирост антител в 100% случаях к вирусу гриппа типа А (H1N1) и В и в 70%— к вирусу гриппа типа А (H3N2). Клиническое исследование (II фаза) вакцины «Грифор®» проводилась на 2 базах: ГУ НИИ вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова РАМН (г. Москва) и ГУ НИИ гриппа РАМН (г. Санкт-Петербург) в соответствии с решением Федерального комитета по этике и разрешением Росздравнадзора. Целью данного исследования являлось изучение реактогенности, безопасности и иммуногенности вакцины «Грифор®» при однократной иммунизации людей в возрасте от 18 до 60 лет.

В простом слепом сравнительном клиническом исследовании приняли участие 300 волонтеров, по 150 человек на каждой базе, полностью соответствующие критериям включения протокола. Методом случайного распределения все добровольцы были поделены на 3 группы.

В 1 группе 50 человек были привиты вакциной «Грифор®» с содержанием гемагглютинина— 45 мкг/доза— по 15 мкг гемагглютинина штаммов вирусов гриппа подтипов А (H1N1 и H3N2) и типа В. Во 2 группе 50 человек были привиты вакциной «Грифор®» с содержанием гемагглютинина— 35 мкг/доза— по 10 мкг гемагглютинина штаммов вируса гриппа типа А (H1N1) и A (H3N2) и 15 мкг НА типа В.

В 3 группе 50 человек были привиты препаратом сравнения— вакциной «Ваксигрип» с содержанием гемагглютинина— 45 мкг/доза— по 15 мкг гемагглютинина штаммов вирусов гриппа подтипов А (H1N1 и H3N2) и типа В.

Полученные при исследовании данные позволили сделать следующие выводы:

  • вакцинация добровольцев препаратами «Грифор®» в дозах 35 и 45 мкг и «Ваксигрип» в дозе 45 мкг не сопровождалась развитием тяжелых местных и общих реакций в поствакцинальном периоде, а возникшие слабовыраженные реакции были кратковременны и не вызывали ухудшения состояния здоровья привитых, что свидетельствовало о безопасности препарата;
  • однократная внутримышечная иммунизация добровольцев вакцинами «Грифор®» и «Ваксигрип» позволила обеспечить следующие показатели иммуногенности к вирусу гриппа типов А (H1N1), A (H3N2) и В:
  • ✦Грифор® в дозе 35 мкг:
  • уровень сероконверсии 89,8%, 83,9% и 77,5%;
  • уровень серопротекции 91,1%, 86% и 70,4%;
  • кратность прироста антител 16,7; 8,5 и 8 соответственно.
  • ✦Грифор® в дозе 45 мкг:
  • уровень сероконверсии 93,3%, 88,4% и 77,4%;
  • уровень серопротекции 90,6%, 93% и 75,2%;
  • кратность прироста антител 17,4; 10 и 6,8 соответственно.
  • ✦Ваксигрип в дозе 45 мкг:
  • уровень сероконверсии 94,8%, 92,2% и 82,3%;
  • уровень серопротекции 96,1%, 94,4% и 84,4%;
  • кратность прироста антител 24,8; 11 и 11,5 соответственно.

В соответствии с требованиями ВОЗ была проведена оценка длительности сохранения поствакцинального иммунитета через 6 месяцев у вакцинированных добровольцев (табл. 1).

В результате изучения длительности сохранения поствакцинального иммунитета (на 180 дней от начала иммунизации) было показано, что уровень сохранения величины титров антител у добровольцев, привитых вакциной «Грифор®», был выше по сравнению с таковым у привитых вакциной «Ваксигрип». По-видимому, это обусловлено тем, что вакцина «Грифор®», в отличие от вакцины «Ваксигрип», содержит в своем составе виросомы. При сравнительном изучении гриппозных вакцин рядом авторов было отмечено, что виросомальные вакцины индуцируют более высокую иммуногенность и более длительное сохранение протективных антител, по сравнению с традиционными субъединичными и расщепленными вакцинами, по-видимому в результате адъювантных свойств .

Результаты сравнительного клинического исследования II фазы показали, что иммуногенности вакцин «Грифор®» в дозировках 35 мкг и 45 мкг, а также вакцины «Ваксигрип» практически одинаковы и соответствуют всем трем критериям CPМP EMEA. Дополнительно был проведен анализ достоверности различий по уровням сероконверсии и уровням серопротекциии по всем трем серотипам вируса гриппа между исследуемыми препаратами. Из полученных результатов следует, что по уровню сероконверсий вакцина «Ваксигрип» достоверно отличается от вакцины «Грифор®» в дозе 35 мкг и «Грифор®» в дозе 45 мкг только по серотипу В. Вакцина «Грифор®» в дозе 35 мкг по уровню сероконверсии достоверно не отличается от вакцины «Грифор®» в дозе 45 мкг (р<0,05). По уровню серопротекции все три препарата («Грифор®» в дозе 35 мкг, «Грифор®» в дозе 45 мкг и «Ваксигрип») достоверно не отличаются (р<0,05). В соответствии с утвержденным протоколом клинического исследования на аккредитованных исследовательских базах: ГУ научно-исследовательский институт гриппа РАМН (ГУ НИИ гриппа РАМН, г. Санкт-Петербург), Пермская государственная медицинская академия им. академика Е. А. Вагнера (ПМА им. академика Е. А. Вагнера, г. Пермь) и Сибирский государственный медицинский университет Росздрава (СибГМУ, г. Томск) было проведено клиническое исследование по изучению профилактической эффективности вакцины «Грифор®» в эпидсезон 2007–2008 гг.

В многоцентровом, контролируемом, проспективном, рандомизированном исследовании приняли участие 5 611 добровольцев (мужчины и женщины) в возрасте от 18 лет и старше, рандомизированные в две группы в соотношении 1,2:0,8. Основная группа— 3107 добровольцев (из Санкт-Петербурга— 1018; из Томска— 1585; из Перми— 504) привиты вакциной «Грифор®». В организованных коллективах была сформирована группа наблюдения, численностью 2504 человека (из Санкт-Петербурга— 1000; из Томска— 1000; из Перми— 504), у которых при подтверждении диагноза «грипп» сопоставлялась заболеваемость с основной группой.

Профилактическую эффективность вакцины оценивали по двум показателям:

  • индекс эффективности (ИК) К = b/a, где К— индекс эффективности, а— заболеваемость на 1000 среди вакцинированных, b— заболеваемость на 1000 среди невакцинированных;
  • коэффициент эффективности (КЭ) E = 100×(b – a)/b, где Е— коэффициент эффективности (в %), а— заболеваемость среди вакцинированных, b— заболеваемость среди невакцинированных.

В случае заболевания и лабораторного подтверждения диагноза «грипп» у добровольцев основной группы и группы наблюдения была сопоставлена заболеваемость, оценены клиническое течение и тяжесть заболевания, возникновение осложнений.

На протяжении исследования осуществляли дифференциальную диагностику гриппа с другими вирусными и бактериальными инфекциями. Грипп диагностировали на основании клинических данных, а именно выявления основных симптомов: высокая температура, достигающая 39–40°С, длительностью около 3–4 дней; озноб; насморк; першение и боль в горле; сухой, лающий кашель, который сохранялся в течение 2 недель; общая выраженная слабость, недомогание, разбитость; боль и «ломота» в мышцах и суставах; одышка; боль при движении глаз, конъюнктивит.

Кроме того, для подтверждения клинического диагноза «грипп» среди вакцинированных и невакцинированных участников исследования проведены серологические исследования парных сывороток в первые дни заболевания и через 14–21 день, а также оценены клиническое течение и тяжесть заболевания.

Общая продолжительность наблюдения для каждого участника клинического исследования составила не менее 6 месяцев.

Проведенный анализ заболеваемости гриппом и ОРВИ в эпидемический сезон 2007–2008 гг. у привитых добровольцев и наблюдательной группы (невакцинированные) в Санкт-Петербурге, Томске и Перми позволил рассчитать профилактическую эффективность новой отечественной инактивированной расщепленной гриппозной вакцины «Грифор®». Коэффициент эффективности вакцины «Грифор®» в отношении лабораторно подтвержденного гриппа составляет 86,5%, а индекс эффективности 7,4 (табл. 2).

Индекс (ИЭ) и коэффициент (КЭ) эффективности вакцины«Грифор®»

Высокие показатели профилактической эффективности вакцины «Грифор®» по сравнению с зарубежными расщепленными и субъединичными вакцинами могут быть обусловлены отсутствием в их составе виросом. Согласно результатам морфологического анализа доказано, что вакцина «Грифор®» является виросомальной. По данным литературы презентация поверхностных антигенов вируса гриппа (гемагглютинина и нейраминидазы) в составе виросом существенно изменяет иммуногенность этих антигенов для вакцинированных людей. Показано, что виросомальная вакцина «Инфлексал В» обладала более высокой иммуногенностью по сравнению с традиционными расщепленными вакцинами второго поколения, в частности, по сравнению с расщепленной вакциной «Флюарикс». Антигены вируса гриппа в составе виросом способны индуцировать не только гуморальный, но и клеточный иммунитет, тем самым обеспечивая перекрестную защиту от дрейфующих эпидемических штаммов вирусов гриппа. Таким образом, более высокая иммуногенность и способность индуцировать клеточный иммунитет позволяют считать виросомальные гриппозные вакцины наиболее оптимальными для профилактической вакцинации против вируса гриппа.

Важным фактором усиления иммуногенных свойств вакцины «Грифор®» является наличие в ее составе помимо поверхностных антигенов, представленных в виде виросом, также внутренних антигенов вируса гриппа (белка нуклеокапсида и мембранного белка), выделенных с помощью оригинальной технологии, позволяющей максимально сохранить их биологическую и иммунохимическую нативность. Из литературы известно, что добавление в состав вакцины «Ваксигрип» мембранного белка вируса гриппа, выделенного с максимальным сохранением нативности, существенно усилило протективную способность вакцины в опытах на лабораторных животных. Согласно результатам II фазы клинического изучения было показано, что показатели длительности сохранения поствакцинального иммунитета у добровольцев, привитых вакциной «Грифор®» были существенно выше, по сравнению с аналогичным показателем у привитых вакциной «Ваксигрип», что, возможно, обусловлено наличием виросом в составе вакцины «Грифор®» и их адъювантными свойствами. Это подтверждается данными литературы относительно зарубежных виросомальных вакцин. В результате проведенных доклинических и клинических исследований показано, что вакцина «Грифор®» является ареактогенной, безопасной и высокоиммуногенной, а также обладает высокой профилактической эффективностью, что позволяет считать ее первой российской виросомальной вакциной нового поколения, которая соответствует по всем показателям зарубежных виросомальных вакцин. В 2008 г. вакцина «Грифор®» была зарегистрирована в Российской Федерации (РУ № ЛСР-001419/08 от 11.03.2008 г.) и разрешена к медицинскому применению.

По вопросам литературы обращайтесь в редакцию.


В. В. Зверев*, доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН Н. А. Михайлова*, доктор медицинских наук, профессор С. А. Коровкин, доктор медицинских наук, профессор А. Н. Миронов, кандидат медицинских наук С. Я. Мельников, кандидат биологических наук М. К. Ерофеева**, доктор медицинских наук Н. В. Дылдина И. Ю. Никоноров** В. Л. Максакова**, кандидат медицинских наук *ГУ НИИ вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова РАМН, **ГУ НИИ гриппа РАМН, Москва ООО «ФОРТ», Рязань